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详细介绍Detailed Introduction

免疫共沉淀(Co-IP)
背景介绍
Co-IP、ChIP、RIP、Pull down作为常见的分子互作验证方法。可以从检验的出发点来区分它们:Co-IP、ChIP、RIP是利用已知的蛋白检测体内相关蛋白或核酸,并通过蛋白抗体免疫沉淀分离目标蛋白或核酸。Pull down则是根据已知RNA(RNA pull down)或者已知蛋白(GST pull down)体外检测相关蛋白。
 
实验原理及流程
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)以抗体和抗原之间的特异免疫反应为基础,是研究蛋白质互作的经典方法。基本原理是在细胞裂解液中加入抗原特异的抗体进行孵育,若裂解中有和抗原互作的蛋白,则会形成“抗体-抗原-抗原互作蛋白”的免疫复合物,该免疫复合物经纯化、洗脱、收集,即可用于SDS-PAGE、western blot及质谱分析,进而鉴定出与抗原有互作的蛋白质。
 
应用场景
鉴定出与已知蛋白相互作用的未知蛋白
验证两个蛋白在体内存在相互作用
 
实验流程和周期
使用自身蛋白抗体:蛋白样品准备 — Protein G磁珠与抗体结合 — 免疫沉淀分离 — 洗脱蛋白复合物 — SDS-PAGE分离、western blot及(或)质谱鉴定相互作用蛋白质——实验报告提交
实验周期:15个工作日,如需质谱鉴定按难易程度需要15-45天
 
使用常见标签抗体:蛋白样品准备 — 琼脂糖beads与抗体结合 — 免疫沉淀分离 — 洗脱蛋白复合物 — SDS-PAGE分离、western blot及(或)质谱鉴定相互作用蛋白质——实验报告提交
实验周期:15个工作日,如需质谱鉴定按难易程度需要15-45天
 
客户下单项目信息填写
1,客户按照提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交;
2,提交项目所需要的具体信息,包括:(1)组织、细胞、蛋白质溶液等样品、用于免疫共沉淀的一抗(如果公司抗体库里没有)及目的蛋白的相关信息;(2)如需构建基因的过表达载体,则还需提供过表达载体及其相关信息,没有载体的本公司可以构建载体;(3)其他与免疫共沉淀相关信息。

送样标准


 
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看地址。实验结题后,实验报告,检测结果可在线查看或打印,并永久保留。
 
实验交付结果
1、免疫共沉淀电子图片及分析结果;
2、相互作用蛋白鉴定结果,western blot鉴定结果和(或)质谱鉴定结果;
3、完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。

 

图 Co-IP实验结果展示


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